泛亚电竞提供的RIN-14B大鼠胰岛素瘤细胞培养指导，包括细胞培养条件、操作步骤及售后服务条款，为科研人员提供全面的支持。

一、细胞培养条件

细胞名称：RIN-14B大鼠胰岛素瘤细胞

生长特性：该细胞为贴壁生长型，适用于无血清冻存液（货号：C7001）进行冻存。

培养体系：1640培养基 + 10% FBS + 1% 双抗

传代方法：首次建议采用1:2的传代比例，建议每两天更换培养基。

备注：建议使用无菌离心管收集培养基，以便进行对比实验。如果对比实验效果不理想，可直接选用泛亚电竞的完全培养基。

二、收到细胞后的处理

收到细胞后，首先培养至良好状态，然后将培养瓶灌满完全培养液并密封。使用75%酒精对包装进行消毒，随后在超净台内进行无菌操作。将细胞瓶放置于37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态。显微镜下观察细胞生长情况，务必对细胞进行不同倍数的拍照记录（建议40x、100x和200x各一张），前三日的照片是售后服务的重要依据。如未提供照片，默认细胞状态正常。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

若细胞未达到80%融合度，需将完全培养液收集至离心管中，保留5ml的培养基在37℃、5% CO2的环境中继续培养。当细胞密度超过80%时，可进行传代，具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁的PBS清洗细胞1-2次。
2. 向培养瓶中添加1-2ml消化液（0.25% 胰蛋白酶-0.53mM EDTA），在37℃培养箱内消化1-2分钟，观察细胞状态后快速采用5ml完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，确保细胞完全脱落，转移至15ml离心管，并在1000RPM离心5分钟后弃去上清，再加入1-2ml完全培养基重悬。
4. 按照1:2的比例进行分瓶传代（如分为两个T25瓶），补充新鲜完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中继续培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶80%时，弃去培养液，并用PBS清洗。
2. 添加约1ml的0.25% 胰蛋白酶消化液，观察细胞变圆后加入5ml完整培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞使其脱落，转移至15ml离心管，1000RPM离心5分钟。
4. 去除上清后，将沉淀细胞加入1ml的泛亚电竞无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转入冻存管中。
5. 将冻存细胞立即放入-80℃冰箱存放，若需要转入液氮罐，须在-80℃冰箱中存放24小时以上。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管（佩戴好防护装备），快速在37℃水浴中解冻，直至冻存管内无结晶；随后用75%的酒精擦拭冻存管外壁。
2. 将解冻的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，并进行1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，重悬于5ml完全培养基中，并接种至T25培养瓶，置于37℃、5% CO2培养箱中继续培养。
4. 第二天换用新鲜完全培养基以继续培养。

四、注意事项

在运输过程中，由于某些细胞贴壁不牢，可能会出现脱落，这是正常现象。建议将培养液收集至离心管，1000RPM离心5分钟，以便进行过渡培养，后续再按上述传代方法处理。

五、售后条款

1）可重发的情况及判定标准：

1. 若细胞在运输途中遭遇问题，如丢失、破损或严重漏液，均可重发。
2. 细胞如有污染，需在收到产品48小时内提供真实的实验结果，经核实可重发。
3. 常温发货细胞在静置24小时后，干冰发货细胞如复苏后24小时内未存活（需提供清晰的状态照片）可重发。
4. 如干冰发货的细胞在复苏后24小时内或常温发货的细胞在未开封静置4小时后出现污染，均可重发。
5. 若细胞活性问题，应在收到产品7天内提供真实实验结果（使用台盼蓝染色法），经核实后可重发。
6. 在收到细胞当天及接下来的2至3天内需拍照，如3天内未告知问题，视产品为合格。
7. 如在4至7天内出现问题，需提供收到细胞前三天的照片及问题发生时的照片，详细操作步骤并与技术人员沟通，若确认属我方责任，则可重发；若判定为双方责任，则需协商处理，或按合同价格的50%收费重发。

2）不予重发的情况：

1. 客户自行造成的细胞污染不予重发。
2. 因客户不当操作导致的细胞状态不良不予重发。
3. 使用非泛亚电竞推荐的培养体系导致细胞状态不良不予重发。
4. 细胞状态不良且未提供前三天照片的不予重发。
5. 细胞在培养过程中经其他处理的不予重发。
6. 收到细胞后2天内未告知问题的不予重发。
7. 视具体情况而定。

选择泛亚电竞为您的细胞培养需求提供专业支持，确保科研工作的顺利进行。